GCMS法测定血浆中极长链脂肪酸含量
发布日期：2023-10-10 来源：本站 浏览数：1096 人
作者：岛津分析中心董梅
编辑：岛津分析中心钱立立、岛津市场部姜啸龙
过氧化酶体在细胞代谢中起着重要作用。过氧化物酶体组装缺陷或单一过氧化物酶体代谢紊乱与多种遗传性疾病的发生密切相关，包括X-连锁肾上腺脑白质营养不良症（X-ALD）、Zellweger综合征（ZS）、ADP-酰辅酶A氧化酶缺乏症（AOx）和单一酰基-CoA氧化酶缺陷症（SCAD）。X-ALD是过氧化酶体缺陷病最常见的形式，由ABCD1基因突变引起，该基因编码介导摄取极长链脂肪酸的转运蛋白，导致过氧化酶体缺陷病患者积累极长链脂肪酸。所以血浆中极长链脂肪酸的浓度是诊断X-ALD和过氧化酶体缺陷病的重要指标。
利用气相色谱质谱联用仪GCMS-QP2020 NX对血浆中3种极长链脂肪酸二十二烷酸（C22:0）、二十四烷酸（C24:0）和二十六烷酸（C26:0）进行定量。该方法结果准确，灵敏度高，可为诊断X-ALD提供生化依据。
1．实验部分
1.1 仪器
岛津GCMS-QP2020 NX气相色谱质谱联用仪。
1.2 样品前处理
量取血浆样本至离心管中，加入2 mL提取溶剂，涡旋，离心
重复提取一次，合并两次提取上清液
加入2 mL 生理盐水，涡旋，离心
取有机相至离心管中，氮气吹至干，加入甲酯化试剂
酯化反应完成后加入2 mL正己烷提取，提取过程重复2次
合并2次提取的上清液至离心管中，氮吹至近干
加入200 μL正己烷，复溶，上机分析
极长链脂肪酸标准溶液按1.2样品前处理后上机分析，谱图见图2，化合物信息见表1。
2.2 标准曲线和检出限
配置3种目标组分标准溶液，上机分析，并制作标准曲线，见图3。结果表明在10~80 µmol/L浓度范围内，二十二烷酸、二十四烷酸线性相关系数分别为0.9998和0.998，在0.4~3.2 µmol/L浓度范围内，二十六烷酸线性相关系数为0.9972，线性关系良好。根据标准曲线最低浓度点数据，以3倍信噪比（peak to peak）计算3种目标物仪器检出限，结果见表2，质量色谱图见图4。
2.3 重复性实验
选取标准曲线最低浓度点标准溶液，连续进样6次，峰面积RSD均不超过3.63%，见表3。
取正常人血浆样本平行处理6份，连续上机分析，3组分检测结果RSD均小于4.5%，见表4。
2.4 加标回收率
向血浆样本中添加目标组分标准溶液，高低两个加标浓度，平行处理3份，上机分析。加标回收率结果见表5，加标样品谱图见图5。
2.5 实际样品测试结果
取血浆样本，按照1.2样品前处理后上机分析。血浆样本谱图及结果如下。
利用岛津气质联用仪GCMS-QP2020 NX建立了血浆中二十二烷酸、二十四烷酸和二十六烷酸三种极长链脂肪酸的内标法定量方法。并对方法的线性、检出限、准确度和精密度进行了考察。实验结果表明：该方法抗干扰能力强，灵敏度高，结果准确，能够有效地监测血浆中3种极长链脂肪酸含量，检测结果为诊断X-ALD提供可靠的生化依据。
注：本方法仅供临床研究，不用于临床诊断。
编辑：岛津分析中心钱立立、岛津市场部姜啸龙
过氧化酶体在细胞代谢中起着重要作用。过氧化物酶体组装缺陷或单一过氧化物酶体代谢紊乱与多种遗传性疾病的发生密切相关，包括X-连锁肾上腺脑白质营养不良症（X-ALD）、Zellweger综合征（ZS）、ADP-酰辅酶A氧化酶缺乏症（AOx）和单一酰基-CoA氧化酶缺陷症（SCAD）。X-ALD是过氧化酶体缺陷病最常见的形式，由ABCD1基因突变引起，该基因编码介导摄取极长链脂肪酸的转运蛋白，导致过氧化酶体缺陷病患者积累极长链脂肪酸。所以血浆中极长链脂肪酸的浓度是诊断X-ALD和过氧化酶体缺陷病的重要指标。
利用气相色谱质谱联用仪GCMS-QP2020 NX对血浆中3种极长链脂肪酸二十二烷酸（C22:0）、二十四烷酸（C24:0）和二十六烷酸（C26:0）进行定量。该方法结果准确，灵敏度高，可为诊断X-ALD提供生化依据。
1．实验部分
1.1 仪器
岛津GCMS-QP2020 NX气相色谱质谱联用仪。
1.2 样品前处理
量取血浆样本至离心管中，加入2 mL提取溶剂，涡旋，离心
重复提取一次，合并两次提取上清液
加入2 mL 生理盐水，涡旋，离心
取有机相至离心管中，氮气吹至干，加入甲酯化试剂
酯化反应完成后加入2 mL正己烷提取，提取过程重复2次
合并2次提取的上清液至离心管中，氮吹至近干
加入200 μL正己烷，复溶，上机分析
2．结果与讨论
极长链脂肪酸标准溶液按1.2样品前处理后上机分析，谱图见图2，化合物信息见表1。
图1. 标准溶液谱图（C22:0,C24:0 100 µmol/L; C26:0 4 µmol/L）
表1. 化合物信息
配置3种目标组分标准溶液，上机分析，并制作标准曲线，见图3。结果表明在10~80 µmol/L浓度范围内，二十二烷酸、二十四烷酸线性相关系数分别为0.9998和0.998，在0.4~3.2 µmol/L浓度范围内，二十六烷酸线性相关系数为0.9972，线性关系良好。根据标准曲线最低浓度点数据，以3倍信噪比（peak to peak）计算3种目标物仪器检出限，结果见表2，质量色谱图见图4。
图2. 组分标准曲线
图3. 组分质量色谱图（标准曲线最低浓度点）
表2. 组分线性相关系数及检出限
2.3 重复性实验
选取标准曲线最低浓度点标准溶液，连续进样6次，峰面积RSD均不超过3.63%，见表3。
表3. 峰面积重复性结果
取正常人血浆样本平行处理6份，连续上机分析，3组分检测结果RSD均小于4.5%，见表4。
表4. 定量结果重复性
2.4 加标回收率
向血浆样本中添加目标组分标准溶液，高低两个加标浓度，平行处理3份，上机分析。加标回收率结果见表5，加标样品谱图见图5。
图4. 加标血浆样本谱图（C22:0,C24:0加标浓度25 μmol/L; C26:0加标浓度1 μmol/L）
表5. 加标回收率结果
2.5 实际样品测试结果
取血浆样本，按照1.2样品前处理后上机分析。血浆样本谱图及结果如下。
图5. 血浆样本谱图
表6. 血浆样本中目标组分检测结果
利用岛津气质联用仪GCMS-QP2020 NX建立了血浆中二十二烷酸、二十四烷酸和二十六烷酸三种极长链脂肪酸的内标法定量方法。并对方法的线性、检出限、准确度和精密度进行了考察。实验结果表明：该方法抗干扰能力强，灵敏度高，结果准确，能够有效地监测血浆中3种极长链脂肪酸含量，检测结果为诊断X-ALD提供可靠的生化依据。
注：本方法仅供临床研究，不用于临床诊断。
热门推荐
我要留言
