LC-MS/MS结合蛋白沉淀法用于人血浆中胰岛素样生长因子1的测定
发布日期：2023-10-10 来源：本站 浏览数：297 人
作者：岛津分析中心孙亮博士
编辑：岛津分析中心钱立立、岛津市场部刘盼红
胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）亦称为生长介素，是一种小肽类激素，结构与胰岛素原相似，其分子量为7.6kDa。IGF-1的重要作用之一是介导生长激素（GH）在外周靶器官组织的促生长作用。
前期我们已经完成了固相萃取法的方案，本文使用蛋白沉淀法，建立了人血浆中IGF-1含量测定方法，该方法易操作，成本低，灵敏度高，专属性强， 对于IGF-1的临床研究亦有重要意义。
01 实验部分
1.1 仪器
本实验使用岛津临床用超高效液相色谱与三重四极杆质谱仪联用系统。
1.2 分析条件
液相色谱条件：
色谱柱：C18色谱柱
流动相：A相-0.1%甲酸水，B相-0.1%甲酸乙腈
柱温：55℃
样量：10 μL
流速：0.4 mL/min
质谱条件：
1.3 人血浆样品前处理方法
a）取人血浆样品100 μL，加入内标溶液20 μL，涡旋混匀；
b）加入150 μL 50%三氟乙醇水溶液，涡旋混匀；
c）加入200 μL 20%乙腈丙酮溶液（含5%乙酸），涡旋混匀；
d）4000 g离心10 min；
e）吸取200 μL上清液加入1600 μL 冰乙醇，混匀置于-20℃放置45 min；
f）4000 g离心30 min;
g）将上清液倒出，用1600 μL 冰乙醇清洗沉淀；
h）取100 μL 10%乙腈水溶液（含1%甲酸）溶解沉淀，上机分析。
02 结果讨论
2.1 MRM色谱图
2.2 线性测定结果
标准样品经过1.3中的前处理后按1.2中的分析条件进行分析，内标法制作标准曲线。标准曲线结果见表2，线性相关系数大于0.999，准确度在88.5%~109.6%之间，满足测定需求。
2.3 准确度及精密度测定结果
按1.3中的前处理方法对低中高三浓度质控样品进行前处理，按1.2中的分析条件对质控样品进行分析，每个样品平行制备6份，质控品的准确度及精密度结果如表3所示，结果显示质控品测定准确度结果与理论值接近，均在理论值的±20%范围内，满足临床测定需求。样品平行制备6份进样分析，测定结果RSD在2.1%~6.7%之间，满足临床测定需求。
03 结论
使用岛津临床液相色谱质谱联用系统结合蛋白沉淀法，建立了人血浆中胰岛素样生长因子1测定的方法。并对方法的线性、准确度及精密度进行了考察。结果显示该方法线性良好，准确度及精密度均满足临床要求，易操作，成本低。该方法仅供临床研究参考。
编辑：岛津分析中心钱立立、岛津市场部刘盼红
胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）亦称为生长介素，是一种小肽类激素，结构与胰岛素原相似，其分子量为7.6kDa。IGF-1的重要作用之一是介导生长激素（GH）在外周靶器官组织的促生长作用。
前期我们已经完成了固相萃取法的方案，本文使用蛋白沉淀法，建立了人血浆中IGF-1含量测定方法，该方法易操作，成本低，灵敏度高，专属性强， 对于IGF-1的临床研究亦有重要意义。
01 实验部分
1.1 仪器
本实验使用岛津临床用超高效液相色谱与三重四极杆质谱仪联用系统。
1.2 分析条件
液相色谱条件：
色谱柱：C18色谱柱
流动相：A相-0.1%甲酸水，B相-0.1%甲酸乙腈
柱温：55℃
样量：10 μL
流速：0.4 mL/min
质谱条件：
扫描模式：多反应监测(MRM)
MRM参数：见表1
表1. MRM参数
1.3 人血浆样品前处理方法
a）取人血浆样品100 μL，加入内标溶液20 μL，涡旋混匀；
b）加入150 μL 50%三氟乙醇水溶液，涡旋混匀；
c）加入200 μL 20%乙腈丙酮溶液（含5%乙酸），涡旋混匀；
d）4000 g离心10 min；
e）吸取200 μL上清液加入1600 μL 冰乙醇，混匀置于-20℃放置45 min；
f）4000 g离心30 min;
g）将上清液倒出，用1600 μL 冰乙醇清洗沉淀；
h）取100 μL 10%乙腈水溶液（含1%甲酸）溶解沉淀，上机分析。
02 结果讨论
2.1 MRM色谱图
图1. 标准样品（7.8125 ng/mL）及空白样品谱图
2.2 线性测定结果
标准样品经过1.3中的前处理后按1.2中的分析条件进行分析，内标法制作标准曲线。标准曲线结果见表2，线性相关系数大于0.999，准确度在88.5%~109.6%之间，满足测定需求。
表2. 标准曲线结果
图2. 标准曲线
2.3 准确度及精密度测定结果
按1.3中的前处理方法对低中高三浓度质控样品进行前处理，按1.2中的分析条件对质控样品进行分析，每个样品平行制备6份，质控品的准确度及精密度结果如表3所示，结果显示质控品测定准确度结果与理论值接近，均在理论值的±20%范围内，满足临床测定需求。样品平行制备6份进样分析，测定结果RSD在2.1%~6.7%之间，满足临床测定需求。
表3. 质控样品准确度及精密度考察结果(n=6)
03 结论
使用岛津临床液相色谱质谱联用系统结合蛋白沉淀法，建立了人血浆中胰岛素样生长因子1测定的方法。并对方法的线性、准确度及精密度进行了考察。结果显示该方法线性良好，准确度及精密度均满足临床要求，易操作，成本低。该方法仅供临床研究参考。
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