e)  内标为4-苯基丁胺或其它合适内标物;

      f)  标准物质溶液:
      1)  100μg/mL S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺标准物质溶液: 市售S(+)甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙 胺的甲醇溶液,质量浓度均为100μg/mL,置于冰箱中冷冻保存,保存时间12个月;
      2)  S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺的标准工作溶液:试验中所用其它浓度的标准工作溶液均从上述标准物质溶液用甲醇稀释而得。密封,置于冰箱中冷藏保存,保存时间3个月;
      g)  内标4-苯基丁胺标准溶液:
      1)  1.0mg/mL 4-苯基丁胺标准储备溶液:精密称取4-苯基丁胺标准物质适量,用甲醇配制成 1.0mg/mL 的4-苯基丁胺标准储备溶液,置于冰箱中冷冻保存,保存时间12个月。
      2)  10ng/mL 4-苯基丁胺标准工作溶液:移取1.0 mg/mL 4-苯基丁胺标准储备溶液适量至容量瓶中,加入甲醇稀释,混匀,配制成10ng/mL 4-苯基丁胺标准工作溶液。密封,置于冰箱中冷藏保存,保存时间3个月。

5.2  仪器和材料

      仪器和材料包括:
      a)  液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI);
      b)  电子分析天平: 感量0.1mg;
      c)  离心机;
      d)  超声波清洗仪;
      e)  具塞离心管;
      f)  冷冻研磨仪;
      g)  微量移液器。

6    操作方法

6.1    定性分析

6.1.1    样品前处理

6.1.1.1    案件样品

6.1.1.1.1    尿液样品

      取尿液20μL,加入10ng/mL 4-苯基丁胺内标工作溶液980μL,涡旋振荡,离心,取上清液至进样瓶中,供仪器分析。

6.1.1.1.2    毛发样品

      毛发样品依次用适量的水和丙酮振荡洗涤两次,晾干后剪成约lmm段,置冷冻硏磨仪中粉碎。
      称取毛发粉末20mg,置于10mL具塞离心管中,加入10ng/mL 4-苯基丁胺内标工作溶液1mL,超声1h。离心,取上清液至进样瓶中,供仪器分析。

6.1.1.2    控制样品

6.1.1.2.1    尿液样品

      取空白尿液1mL两份,一份作为空白样品,一份添加10μg/mL的S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺标准工作溶液各5μL,制得0.05μg/mL添加样品。然后分别取空白尿液、添加尿液20μL,余下同6.1.1.1.1,与案件样品平行操作。

6.1.1.2.2  毛发样品

      称取空白毛发样品20mg两份,一份作为空白样品,一份添加S(+)-甲基苯丙胺、R(-)甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺对照品制得0.2 ng/mg添加样品,余下同6.1.1.1.2,与案件样品平行操作。

6.1.2  仪器检测

6.1.2.1  仪器条件

6.1.2.1.1  液相色谱条件

      以下为参考条件,可根据不同仪器实际进行调整:
      a)  色谱柱: Supelco Astec Chirobiotic^TM V2手性柱(或其他等效柱),250mm×2.1mm,5μm
     注: Supelco Astec Chirobiotic^TM V2柱为美国 Supelco公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本技术规范的使用者,并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。
      b)  流动相:含0.1%(V/V)冰醋酸和0.02%(V/V)氨水的甲醇溶液;
      c)  流速:250μL/min;
      d)  柱温:室温;
      e)  进样量:20μL;

6.1.2.1.2  质谱条件

      a)  离子源:电喷雾电离-正离子模式(ESI+);
      b)  检测方式: 多反应监测(MRM);
      c)  离子源电压(IS): 5500V;
      d)  碰撞气(CAD)、气帘气(CUR)、雾化气(GS1)、辅助气(GS2)均为高纯氮气,使用前调节各气流流量以使质谱灵敏度达到检测要求:
      e)  去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)应优化至最佳灵敏度;
      在以上色谱、质谱条件下,4种手性化合物和内标的定性离子对、定量离子对和保留时间见表1。4种目标物的MRM色谱图参见附录A。

表1  4种手性化合物和内标的定性离子对、定量离子对和保留时间

6.1.2.2  进样

      分别吸取案件样品、空白样品和添加样品提取液,按6.1.2.1条件进样分析。

6.1.2.3  记录

      记录各样品中目标物可疑色谱峰的保留时间、离子对丰度比。

6.1.2.4  定性判断依据

      以保留时间、质谱特征碎片离子峰和相对丰度比作为定性判断依据。
      如果案件样品中岀现目标物的两对定性离子对的色谱峰,保留时间与添加样品中相应标准物质的色谱峰保留时间比较,相对误差在±2.5%内,且定性离子对丰度比与浓度相近添加样品的离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围,则可判断案件样品中存在该种目标物。

6.2  定量分析

本技术规范采用内标-工作曲线法或内标-单点校正法定量分析。

6.2.1  样品前处理

      移取(或称取)案件样品尿液20μL(或毛发20mg)两份,余下同6.1.1.1.1(或6.1.1.1.2)
      另取相同基质空白样品若干份,添加适量目标物,制得系列质量浓度(质量分数)或单点质量浓度(质量分数)的添加样品,与案件样品平行操作。方法学有效性验证数据参见附录B案件样品中目标物的质量浓度(质量分数)应在工作曲线的线性范围内。配制单点质量浓度(质量分数)的添加样品时,案件样品中目标物质量浓度(质量分数)需在该质量浓度(质量分数)的±50%内。

6.2.2  仪器检测

6.2.2.1  仪器条件

      同6.1.2.1。

6.2.2.2  进样

      分别将案件样品、系列质量浓度(质量分数)的添加样品或单点质量浓度(质量分数)添加样品按6.1.2.1条件进样分析。

6.2.3  记录与计算

      记录案件样品、系列质量浓度(质量分数)的添加样品或单点质量浓度(质量分数)添加样品中目标物及内标物的峰面积值,然后计算含量。

6.2.3.1  内标工作曲线法

      在系列质量浓度(质量分数)的添加样品中,以目标物与内标物定量离子对的峰面积比(Y)为纵坐标、目标物质量浓度(质量分数)(C)为横坐标进行线性回归,得线性方程。

      根据各样品中目标物及内标物定量离子对的峰面积值,按式(1)计算出案件样品中目标物的质量浓度(质量分数)。

     

      式中:
      C—案件样品中目标物的质量浓度(质量分数),单位为微克每毫升(μg/mL)或纳克每毫克(ng/mg);
      Y—案件样品中目标物与内标物定量离子对的峰面积比:
      a—线性方程的截距;
      b—线性方程的斜率。

6.2.3.2  内标-单点校正法

      根据案件样品和添加样品中目标物与内标物定量离子对的峰面积值,按式(2)计算岀案件样品中目标物的质量浓度(质量分数)。

7  分析结果评价

7.1  定性分析结果评价

7.1.1  阴性结果评价

如果案件样品中未检出S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺成分,添加样品中检出S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺成分,则阴性结果可靠;如果添加样品中未检出S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺成分,则阴性结果不可靠,应按6.1重新检验。

7.1.2  阳性结果评价

      如果案件样品中检出S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺成分且空白样品无干扰,则阳性结果可靠;如果空白样品亦呈阳性,则阳性结果不可靠,应按6.1重新检验。

7.2  定量分析结果评价

      两份案件样品的相对相差不超过20%(腐败检材不超过30%)时,结果按两份案件样品含量的平均值计算,否则需要重新测定。

      数据釆用:S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R(-)-苯丙胺和内标均采用定量离子对峰面积。

B.2  尿液样品的方法准确度、精密度

      数据釆用:S(+)-甲基苯丙胺、R(-)-甲基苯丙胺、S(+)-苯丙胺和R()-苯丙胺和内标均釆用定量离子对峰面积。

B.4  毛发样品的方法准确度、精密度

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