前言：本技术规发规定了血液、尿液及毛发中苯丙胺（AMP）、甲基苯丙胺（MAMP）、3、4-亚甲双氧甲 基苯丙胺（MDMA）、4、5-亚甲双氧苯丙胺（MDA）、哌替啶和氯胺酮的免一筛选法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-串联质谱法测定方法。本站只介绍后两种方法。
1 范围
2 规范性引用文件
GA/T 122 毒物分析名词术语
第二篇 气相色谱-质谱联用法
7 原理
8 试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。
8.1 AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮
纯度≥98%。
8.2 AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶、氯胺酮对照品溶液的制备
8.3 10%氢氧化钠溶液
8.4 乙醚
8.5 甲醇
8.6 丙酮
8.7 0.1%十二烷基磺酸钠溶液
8.8 0.1%洗洁精溶液
8.9 0.1mol/L 盐酸溶液
9.1 气相色谱-质谱联用仪
配有电子轰击源（EI）。
9.2 分析天平
感量0.1mg。
9.3 微波炉
9.4 涡旋混合器
9.5 离心机
9.6 恒温水浴锅
9.7 空气泵
9.8 移液器
9.9 具塞离心试管
9.10 冷冻研磨机
10 测定步骤
10.1 样品预处理
10.1.1 尿液直接提取
取尿液 2mL 置于 10mL 具塞离心管中，用 10% 氢氧化钠溶液调至 pH>11，用乙醚 3mL 提取，涡旋混合、离心，转移有机层至另一离心管中，约 60℃ 水浴中挥干，残留物用 50μL 甲醇溶解，取 1μL进气相色谱/质谱联用仪分析。
10.1.2 血液直接提取
10.1.3 毛发提取
10.1.3.1 毛发采集
贴发根处剪取毛发，发根处作标记。量取长度。
10.1.3.2 毛发洗涤
毛发样品依次用 0.1%十二烷基磺酸钠溶液、0.1%洗洁精溶液、水和丙酮振荡洗涤，晾干后剪成约1mm 段，供检。
10.1.3.3 毛发的水解
10.1.3.3.1 毛发的酸水解
称取 50mg 毛发，加 1mL 0.1mol/L 盐酸溶液浸润，45℃水浴水解 12～15 小时，取出后用 10% 氢氧化钠溶液调至 pH>11。
称取 50mg 毛发，加 1mL 10% 氢氧化钠溶液，80℃ 水浴水解 5～10min，取出。
10.1.3.4 毛发的提取
毛发水解液用乙醚 3mL 提取，涡旋混合、离心分层，转移乙醚层至另一离心管中，约 60℃ 水浴中挥干。残留物用 50μL 甲醇溶解，取 1μL 进气相色谱-质谱联用仪分析。
10.2 样品测定
10.2.1 气相色谱-质谱参考条件
l） AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶及氯胺酮的保留时间与特征碎片离子见表 1。
10.2.2 定性分析
进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与空白检材添加相应对照品的色谱峰保留时间比较，相对误差在±2%内，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子相对丰度比与添加对照品的离子相对丰度比之相对误差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在这种化合物。
10.2.3 定量测定
采用外标-校准曲线法或单点法定量。用相同基质空白添加适量目标物对照品制得一系列浓度校准样品，以目标物的峰面积对目标物浓度绘制校准曲线，并且保证待测样品中目标物的浓度在其线性范围内。当待测样品中目标物浓度在添加样品浓度的±50%以内时，可采用单点校准。
10.3 平行试验
`C——两份样品平行定量测定结果的平均值（C1+ C2）/ 2。
10.4 空白试验
除以相同基质空白替代检材外，均按上述步骤进行。
11 结果计算
12 方法检出限
血液、尿液和毛发中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的检出限见附录A。
第三篇 液相色谱-串联质谱法
13 原理
利用苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮易溶于有机溶剂、难溶于水的特点，在碱性条件下用有机溶剂从生物检材中提出，提取后的样品用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）的多反应监测（MRM）模式进行检测，经与平行操作的苯丙胺类兴奋剂或哌替啶、氯胺酮对照品比较，以保留时间和两对母离子/子离子对进行定性分析；以定量离子对峰面积为依据，外标法定量。
14 试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
同 8.1 及 8.2。
14.2 丙酮
14.3 乙醚
14.4 10%氢氧化钠溶液
14.5 0.1mol/L 盐酸溶液
14.6 0.1%十二烷基磺酸钠溶液
14.7 0.1%洗洁精溶液
14.8 乙腈
色谱纯。
14.9 甲酸
优级纯。
14.10 乙酸铵
色谱纯。
14.11 流动相缓冲液
15 仪器
15.1 液相色谱-串联质谱仪
配有电喷雾离子源（ESI）。
15.2 分析天平
感量0.1mg。
15.3 涡旋混合器
15.4 离心机
15.5 恒温水浴锅
15.6 移液器
15.7 具塞离心试管
15.8 冷冻研磨机
16 测定步骤
16.1 样品预处理
16.1.1 尿液提取
取尿液 2mL 置于 10mL 具塞离心管中，用 10% 氢氧化钠溶液调至 pH>11，用乙醚 3mL 提取，涡旋混合、离心，转移有机层至另一离心管中，约 60℃ 水浴中挥干，残留物中加入 100μL 乙腈: 流动相缓冲液（70: 30）进行溶解，取 5μL 进 LC-MS/MS 分析。
16.1.2 血液提取
取血液 2mL 置于 10mL 具塞离心管中，加入 10%氢氧化钠溶液 0.2mL，用乙醚 3mL 提取，以下同16.1.1 项下操作。
16.1.3 毛发提取
称取 50mg 毛发，同 10.1.3.3 项酸水解或碱水解后，用乙醚 3mL 提取，以下同 16.1.1 项下操作。
16.2 样品测定
16.2.1 液相色谱-串联质谱参考条件
j） 每个化合物分别选择 2 对母离子/子离子对作为定性离子对。其定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE）和保留时间（tR）见表 3。
16.2.2 定性测定
进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与空白检材添加对照品的色谱峰保留时间比较，相对误差小于 2%，并且在扣除背景后的样品质谱图中，均出现所选择的离子对，而且所选择的离子对相对丰度比与添加对照品的离子对相对丰度比之相对误差不超过表 4 规定的范围，则可判断样品中存在这种化合物。
16.2.3 定量测定
采用外标-校准曲线法或单点法定量。用相同基质空白添加适量目标物对照品制得一系列校准样品，以目标物的峰面积对目标物浓度绘制校准曲线，并且保证所测样品中目标物的响应值在其线性范围内。当待测样品中目标物浓度在添加样品浓度的±50%以内时，可采用单点校准。
16.3 平行试验
平行试验中两份检材测定结果按两份检材的平均值计算，双样相对相差不得超过 20％（腐败检材不超过 30%）。双样相对相差按式（1）计算：
`C ——两份样品平行定量测定结果的平均值（C1+ C2）/ 2。
16.4 空白试验
除以相同基质空白替代检材外，均按上述步骤进行。
17 结果计算
以外标-校准曲线法或按式（2）计算被测样品中 AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶及氯胺酮浓度：
W1 ——待测样品取样量（mL 或 g）。
18 方法检出限
血液、尿液和毛发中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的检出限见附录A。
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