1  范围

      GBZ/T 313的本部分规定了测定尿中三甲基氯化锡的气相色谱-质谱法。
      本部分适用于职业接触人员尿中三甲基氯化锡的测定。

2  规范性引用文件

      下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
      GBZ/T 295职业人群生物监测方法  总则
      WS/T 97尿中肌酐分光光度测定方法
      WS/T 98尿中肌酐的反相高效液相色谱测定方法

3  原理

      尿中三甲基氯化锡用四乙基硼酸钠衍生成为三甲基乙基锡,经正己烷萃取,气相色谱-质谱检测,以保留时间和特征离子的丰度比值进行定性,用特征离子 165m/z 的离子丰度值(峰面积)定量。

4  仪器

4.1  具塞聚乙烯塑料瓶, 50mL。

4.2  离心机, 0 r/min~3000 r/min。

4.3  微量注射器, 1 μL、10 μL、50 μL、100 uL

4.4  具塞玻璃管: 15mL, 配有聚四氟乙烯密封盖。

4.5  旋涡振荡器。

4.6  气相色谱-质谱仪。

      仪器操作参考条件：
      a)  色谱条件:
      色谱柱: 60 m×0.32 mm x1.0 μm   二苯基-95%二甲基硅氧烷共聚物(HP-5MS):
      柱温: 初温 50 ℃,以20 ℃/min升到200℃,保持 1.0min;
      汽化室温度: 250℃;
      柱流量: 2.0 mL/min;
      分流比: 5:1。
      b)  质谱条件
      离子源:电子轰击离子源(EI)

      离子化能量:70eV;
      离子源温度:230℃;
      接口温度:260℃;
      扫描模式:选择离子扫描模式,选择165 m/z为定量离子,151 m/z、165 m/z、179 m/z和194 m/z为鉴定离子;
      溶剂延迟时间:40min。

5  试剂

5.1  实验用水为去离子水。

5.2  三甲基氯化锡,优级纯(>99.8%)。

5.3  四乙基硼酸钠,优级纯。

5.4  四氢呋喃,分析纯。

5.5  乙酸钠,分析纯。

5.6  冰醋酸,分析纯。

5.7  正己烷,色谱纯。

5.8  衍生剂:称取0.1 g四乙基硼酸钠,加λ10mL四氢呋喃溶解,配成1%四乙基硼酸钠-四氢呋喃溶液,该溶液置于4℃冰箱中避光保存,可稳定1个月。

5.9  缓冲液(pH 4.0±0.2):在120mL水中加入0.6g乙酸钠,再加1.4mL的冰醋酸。

5.10  标准溶液: 于10 mL容量瓶中,加入少量水,准确称量后,加入一定量的三甲基氯化锡,再准确称量,加水至刻度;由2次称量之差计算此溶液的浓度,为标准贮备液(浓度约为5mg/mL),此液在4℃冰箱内可储存6个月。临用前,用水稀释成50.0μg/mL 三甲基氯化锡标准溶液。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。

6  样品的采集、运输和保存

      用具塞聚乙烯塑料瓶收集接触三甲基氯化锡工人的随机尿样 50mL,于室温或冷藏运输,尽快置4℃冰箱中存放,样品可保存15d。

7  分析步骤

7.1 按WS/T 97或WS/T 98测定尿中肌酐浓度。

7.2  样品处理: 将尿样摇匀,吸取5.0mL尿样到15mL具塞玻璃管中,分别加入5.0mL缓冲液、0.2mL衍生剂和1.0m正己烷,于旋涡振荡器中振荡5min,静置或离心分层后取上层有机相1.0μL分析。若样品中三甲基氯化锡浓度超过测定范围,可用正己烷稀释后测定,计算时乘以稀释倍数。

7.3  试剂空白处理: 用5.0mL水代替尿样,按样品同样处理,做试剂空白。

7.4  标准系列溶液的配制与测定: 在15mL的具塞玻璃管中加入5.0mL水,再加入标准溶液,配制成含量为0.0μg~2.5μg的三甲基氯化锡标准系列溶液,每个标准系列溶液中再加入5.0mL 缓冲液、0.2mL 衍生剂和1.0mL正己烷,于旋涡振荡器中振荡5min,静置或离心分层后取上层有机相1.0μL 分析。参照仪器操作条件,将气相色谱-质谱仪调节至最佳测定状态,分别进样1.0μL 的正己烷萃取液,测定各标准系列溶液。以测得的165m/z特征离子的离子丰度值(峰面积)，对相应的三甲基氯化锡含量(μg)绘制标准曲线或计算回归方程。

7.5  样品测定:用测定标准系列溶液的操作条件测定样品和试剂空白的165m/z 的离子丰度值(峰面积),由标准曲线或回归方程得三甲基氯化锡的含量(μg)。

8  计算

      按式(1)计算尿中三甲基氯化锡的浓度

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