1  范围

      GBZ/T 318的本部分规定了测定血中三甲基氯化锡气相色谱质谱法。
      本标准适用于职业接触人员血中三甲基氯化锡的测定。

2  规范性引用文件

      下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
      GBZ/T 295 职业卫生生物监测方法  总则

3  原理

      血中三甲基氯化锡用四乙基硼酸钠衍生成为三甲基乙基锡,经正己烷萃取,气相色谱-质谱检测,以保留时间和特征离子的丰度比值进行定性,用特征离子165m/z的离子丰度值(峰面积)定量。

4  仪器

4.1  肝素钠抗凝采血管,5mL。

4.2  离心机,0r/min~3000r/min。

4.3  微量注射器,1μL、10μL、50μL、100μL。

4.4  具塞玻璃管:15mL,配有聚四氟乙烯密封盖。

4.5  旋涡振荡器。

4.6  气相色谱-质谱仪。

      仪器操作参考条件:
      a)  色谱条件
      ——色谱柱:60m×0.32mm×1.0μm二苯基-95%二甲基硅氧烷共聚物(HP-5MS);
      ——柱温:初温50℃,以20 ℃/min升到200℃,保持1.0min;
      ——汽化室温度:250℃；
      ——柱流量:2.0mL/min;
      ——分流比:5:1。
      b)  质谱条件
      ——离子源:电子轰击离子源(EI);
      ——离子化能量:70eV;
      ——离子源温度:230℃;

      ——接口温度:260℃;
      ——扫描模式:选择离子扫描模式,选择165mz为定量离子,151mz、165m/z、179m/z和194mz为鉴定离子;
      ——溶剂延迟时间:4.0min。

5  试剂

5.1  实验用水为去离子水。

5.2  三甲基氯化锡,优级纯(>99.8%)。

5.3  四乙基硼酸钠,优级纯。

5.4  四氢呋喃,分析纯。

5.5  乙酸钠,分析纯。

5.6  冰醋酸,分析纯。

5.7  正己烷,色谱纯。

5.8  乙腈,色谱纯。

5.9  衍生剂: 称取0.1g四乙基硼酸钠,加λ10mL四氢呋喃溶解,配成1%四乙基硼酸钠-四氢呋喃溶液,该溶液置于4℃冰箱中避光保存,可稳定1个月。

5.10  缓冲液(PH 4.0±0.2):在120mL水中加入0.6g乙酸钠,再加1.4mL的冰醋酸。

5.11  标准溶液: 于10mL容量瓶中,加入少量水,准确称量后,加入一定量的三甲基氯化锡,再准确称量,加水至刻度;由2次称量之差计算此溶液的浓度,为标准贮备液(浓度约为5mg/mL),此液在4℃冰箱内可储存6个月。临用前,用水稀释成50.0μg/mL三甲基氯化锡标准溶液。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。

6  样品采集、运输和保存

      用肝素钠抗凝釆血管采集接触三甲基氯化锡工人的血样5mL,于室温或冷藏运输,尽快置于4℃冰箱中存放,样品可保存15d。

7  分析步骤

7.1  样品处理: 将血样从冰箱中取岀,放置恢复到室温后,充分摇匀。准确吸取1.0mL血样于15mL具塞玻璃管中,加入2.0mL缓冲液,摇匀后加入7.0mL乙腈,密封后振荡lmin以充分沉淀蛋白,再以3000r/min离心1min,将上层清液全部转移至另一15mL具塞玻璃管中,加入少量乙腈洗涤沉淀,合并洗涤液于15mL具塞玻璃管中,加λ0.2mL衍生剂,混合后,准确加λ1.0mL正己烷,密封后振荡5min,静置或离心分层后取上层有机相1.0μL分析。若样品中三甲基氯化锡浓度超过测定范围,可用正己烷稀释后测定,计算时乘以稀释倍数。

7.2  试剂空白处理:用1.0mL水代替血样,按样品同样处理,做试剂空白。

7.3  标准系列溶液的配制与测定: 在15mL具塞玻璃管中加λ1.0mL水,再加入标准溶液,配制成含量为0.0μg~2.5μg的三甲基氯化锡标准系列溶液,每个标准系列溶液中再加入2.0mL缓冲液,摇匀后加入7.0mL乙腈和0.2mL衍生剂,混合后准确加入1.0mL正己烷,密封后振荡5min,静置或离心分层后取上层有机相1.0μL分析。参照仪器操作条件,将气相色谱-质谱仪调节至最佳测定状态,分别进样1.0μL的正己烷萃取液,测定各标准系列溶液。以测得的165m/z特征离子的离子丰度值(峰面积)对相应的三甲基氯化锡含量(μg)绘制标准曲线或计算回归方程。

7.4  样品测定: 用测定标准系列溶液的操作条件测定样品和试剂空白的165m/z的离子丰度值(峰面积),由标准曲线或回归方程得三甲基氯化锡的含量(μg)。

8  计算

      按式(1)计算血中三甲基氯化锡的浓度：

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